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色譜柱填料板結原因剖析及解決方案

更新時間:2022-10-28 點擊次數:1215

在色譜柱使用過程中,會出現柱壓高,峰形差等現象,其主要原因是色譜柱填料污染導致的,其中填料板結是填料污染中特殊的一種,下面將對色譜柱填料板結進行原因剖析及解決方案。


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填料板結的表現

色譜柱填料板結,色譜柱打開后會發(fā)現,填料顏色不變,但填料成片狀、塊狀、結晶等結塊現象。

填料板結的原因分析及解決方案

1、鹽析

解決方案:

1)不管是新色譜柱或已經使用過的色譜柱,使用含鹽的流動相都先使用與流動相組成比例相同但不含鹽的溶液進行沖洗置換(避免使用純水),時間建議30個柱體積以上。

2)流動相置換,在方法開發(fā)過程中,多數情況會涉及不同緩沖鹽體系和不同有機相體系的各種嘗試,那么在調整、更換流動相組成的過程中,請務必充分考慮到不同種類緩沖鹽的溶解情況。若不確定所使用的緩沖鹽和有機相之間的互溶情況,可按照不同比例將二者混合,靜置30min,觀察底部是否有沉淀或絮狀物產生。

3)梯度條件,當涉及緩沖鹽-有機相梯度條件時,請確認緩沖鹽在梯度條件中有機相最高點是否能夠充分溶解。當然,不確定的時候也可以和上述方法一樣,將緩沖鹽和有機相按照梯度最高比例混合后靜置,觀察是否有沉淀產生。

2、流動相配制時間過久,流動相長菌,或乙腈等有機相時間過久產生絮狀沉淀。

解決方案:流動相按需配制,純水相流動相一次配制使用不超過12小時。其他含有機相流動相一次使用不超過24小時,也可根據實際情況調整流動相的保質期。

3、其他:如膠狀,絮狀等樣品通過過濾無法去除,也會積壓在篩板和柱頭端,引起柱壓升高。

解決方案:膠狀,絮狀樣品通過工藝,前處理去除干凈后再進液相色譜系統(tǒng)。



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