背景

葉黃素、玉米黃質、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和番茄紅素是天然植物性食品中Z為常見的5種類胡蘿卜素類營養(yǎng)物質，具有維生素A原活性、抗氧化、參與細胞傳遞、免疫功能調節(jié)與促進、保護皮膚免于紫外線傷害和抑制黃褐斑生成等諸多生理保健功效。

但這5種類胡蘿卜素類營養(yǎng)物質的液相色譜同時分離測定一直比較困難，原因是這5種類胡蘿卜素類營養(yǎng)物質之間的極性差異比較大，葉黃素和玉米黃質分子結構中有兩個羥基，極性較強，在反相液相色譜柱（如C18等）上的保留力較弱，而α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和番茄紅素是烴類物質，僅由碳和氫兩種原子構成，無任何極性官能基團，極性極弱，在反相液相色譜柱（如C18等）上的保留力*；另外，更為重要是葉黃素和玉米黃質之間，以及α-胡蘿卜素和β-胡蘿卜素之間，兩兩互為同分異構體，相互間僅是一個碳-碳雙鍵的位置差異，液相分離難度大（分子結構詳見附錄A，特征吸收光譜圖詳見附錄B）。

本應用案例采用月旭科技公司生產的C30反相高效液相色譜柱、兩元梯度洗脫，實現了單次高效液相色譜檢測對葉黃素、玉米黃質、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和番茄紅素這5種類胡蘿卜素類營養(yǎng)物質的分離檢測，且單次高效液相色譜檢測費時為35分鐘。

高效液相色譜檢測條件

1 儀器設備

Welch 高效液相色譜儀，WiSys5000，配備二級管陣列檢測器；

2 液相色譜柱

分析柱：Ultimate XB-C30色譜柱，4.6mm×250mm, 5μm；

保護柱：Ultimate XB-C30，4.6mm×10mm, 5μm；

3 流動相

A相：甲醇:乙腈=1:1；B相：乙酸乙酯；

4 梯度洗脫程序

5 流速

1.0mL/min；

6 檢測波長

476nm；

7 柱溫

30℃；

8 進樣體積

20μL。

高效液相分離色譜圖

從高效液相檢測的色譜圖看，不僅單次檢測，35分鐘內實現同時分離檢測葉黃素、玉米黃質、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和番茄紅素這5種類胡蘿卜素類營養(yǎng)物質，而且互為同分異構體的葉黃素和玉米黃質之間，以及α-胡蘿卜素和β-胡蘿卜素之間，都基本實現了基線分離。

相關色譜耗材 

附錄A：5種類胡蘿卜素天然營養(yǎng)物質的分子結構

附錄A：5種類胡蘿卜素天然營養(yǎng)物質的分子結構